Phản ứng màu Biure là gì – Đại Học buôn bán & Công Nghệ Hà Nội

Phản ứng màu biure

Phản ứng màu Biuret (Biu-re) là phản ứng dùng để nhận biết sự có mặt của liên kết peptit trong cấu tạo hóa học của hợp chất hữu cơ.

Bạn Đang Xem: Phản ứng màu Biure là gì – Đại Học buôn bán & Công Nghệ Hà Nội

Khi có mặt peptit, ion đồng (II) tạo phức màu tím quỳ trong dung dịch kiềm. Một số biến thể của bài kiểm tra này đã được bắt gặp, chẳng hạn như bài kiểm tra BCA và bài kiểm tra Lowry đã được sửa đổi.

Phản ứng màu biuretic cũng có thể được sử dụng để đánh giá nồng độ của protein, vì các liên kết peptit xảy ra với cùng tần số với các axit amin trong peptit. Theo định luật Beer – Lambert, cường độ của màu tím cũng như khả năng hấp thụ ánh sáng ở bước sóng 540 nm tỷ lệ thuận với nồng độ protein.

Trái với cái tên, thuốc thử cho phản ứng này không chứa biuret (H2N-CO-)2NH. cái tên này là do nó cho kết quả dương tính với liên kết peptit như trong phân tử biuretic.

Trong phản ứng này, đồng (II) liên kết với nitơ có trong peptit protein, và đồng thời bị đẩy xuống đồng (I). Các chất đệm, chẳng hạn như Tris và amoni, cản trở phản ứng này, làm cho nó không thích hợp cho các mẫu protein chiết xuất từ ​​các kết tủa amoni sulfat. Do độ nhạy kém và ít nhạy cảm với các axit amin tự do, phương pháp này chủ yếu được sử dụng cho các mẫu mô lớn và các nguồn protein cao khác.

Trong thí nghiệm này, người ta đã dùng Cu (OH).2 sinh ra trong dung dịch kiềm tạo phức màu tím. Dường như, có một số biến thể của phản ứng này cũng được mở rộng để nhận biết các hợp chất hữu cơ.

Phản ứng màu Biuret cũng được sử dụng để định lượng protein bằng cách đo mật độ quang (UV-VIS) của dung dịch phức tạo thành ở bước sóng 540 nm và sau đó tính toán dựa trên định lý Beer-Lambert.

Xem Thêm : &i nét về tiểu sử tổng thống Putin – Democraciaparticipativa.org

Mặc dù không có phân tử buiret trong phân tử protein ((H2N-CO-)2NH) nhưng phép thử vẫn được đặt tên là phản ứng màu Buiret vì loại phản ứng này cũng cho phép thử các liên kết peptit trong phân tử buiret.

Quy trình kiểm tra định tính.

Mẫu thử được xử lý bằng phương pháp thêm dung dịch bazơ mạnh 1% (thường là NaOH hoặc KOH), sau đó nhỏ &i giọt dung dịch CuSO.4. Nếu dung dịch chuyển sang màu tím, chứng tỏ có sự hiện diện của protein (với nồng độ có thể phát giác khoảng 5-160 mg / l).

Biến thể độ nhạy cao

Hai biến thể của thử nghiệm lợi tiểu thường được sử dụng trong phân tích màu hiện đại để phát giác peptit: phân tích axit bicinchoninic (BCA) và phân tích Lowry. Trong các cách thử này, Cu. ion+ Màu biuretic tạo thành trong phản ứng tiếp tục phản ứng với chất khác, tạo ra màu đậm hơn.

Trong bài kiểm tra BCA, Cu+ tạo thành phức màu tím sẫm sau khi phản ứng với axit bicinchoninic (BCA), chất này hấp thụ bước sóng khoảng 562 nm, tạo thành màu mỡ đặc trưng. Phức hợp BCA / đồng dễ hòa tan và hấp thụ hơn nhiều so với phức hợp peptit / đồng, làm tăng độ nhạy của xét nghiệm lợi tiểu lên khoảng 100 lần: phân tích BCA cho phép bắt gặp các protein trong khoảng nồng độ từ 0,0005 đến 2 mg / mL . Ngoài ra, phương pháp phân tích protein BCA tương hợp với nhiều chất hơn, chẳng hạn như chất hoạt động mặt phẳng ở nồng độ lên đến 5% trong mẫu protein.

Trong phương pháp Lowry để phân tích protein, Cu+ bị oxi hóa lại thành Cu2+ bởi MoVI (có trong thuốc thử Folin – Ciocalteu, tạo thành molypden xanh MoIV. Tyrosine có trong protein cũng tạo thành molypden trong những điều kiện này. Phương pháp này có thể phát giác protein ở nồng độ từ 0,005 đến 2 mg / mL). greed color molypden có thể liên kết với thuốc nhuộm hữu cơ như xanh malachi hoặc Auramine O, làm tăng độ nhạy của phản ứng.

Ở Ba Lan, thử nghiệm này còn được gọi là thử nghiệm Piotrowski, để vinh danh nhà sinh lý học người Ba Lan Gustaw Piotrowski (sinh năm 1833), người đầu tiên mô tả thử nghiệm &o năm 1857.

Thuốc thử của Buiret

Xem Thêm : Ca sĩ Thanh Lan và cuộc đời kì lạ – Báo cảnh sát Nhân dân điện tử

Thuốc thử biuret được làm bằng kali hydroxit ngậm nước (KOH), đồng (II) sunfat và natri kali tartrat. Khi thử, nếu có Protein thì thuốc thử chuyển từ màu xanh da trời da trời sang màu tím. Nếu thuốc thử chuyển từ màu xanh lam sang màu hồng thì trong dung dịch có polypeptit mạch ngắn [?]

Không phải tất cả các xét nghiệm biuret đều yêu cầu thuốc thử biuret. Phương pháp thường được sử dụng trong định lượng protein là đo mật độ quang UV-VIS ở bước sóng 540 nm (để phát hiện ion Cu).2+).

Tăng độ nhạy cho bài kiểm tra Buiret.

Cu+ là một chất khử thuốc thử mạnh, nhưng nó có thể bị nockout bỏ bằng cách phản ứng với Mo (VI) trong thuốc thử Folin-Ciocalteu để tạo thành màu xanh molypden. Bằng cách này, protein có thể được phát hiện ở nồng độ từ 0,005 đến 2 mg / mL. [3]. Màu xanh molypden có thể được kết hợp với một số thuốc nhuộm hữu cơ (xanh malachit, Auramin O), giúp khuếch đại tín hiệu trong phép đo quang học. [4]

Cu + tạo phức màu tím đậm với axit bicinchoninic (BCA). [5]Điều này cho phép tăng độ nhạy của xét nghiệm để có thể phát hiện các protein ở nồng độ từ 0,0005 đến 2 mg / mL. Thử nghiệm này thường được gọi bằng tên thương mại là “thử nghiệm”.

Pierce ”khi nhà sản xuất tung ra bộ thử nghiệm này.

Đăng bởi: Trường ĐH KD & CN Hà Nội

Chuyên mục: Lớp 12, Hóa 12